Molecular Diagnostics in Identifying Bovine Mastitis Causing Pathogens

No Thumbnail Available
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Helsinki University of Technology | Diplomityö
Checking the digitized thesis and permission for publishing
Instructions for the author
Date
2004
Major/Subject
Biokemia ja mikrobiologia
Mcode
Kem-30
Degree programme
Language
en
Pages
viii + 82
Series
Abstract
Molekyylidiagnostiikkatekniikat, kuten polymeraasiketjureaktio, ovat lupaavia työkaluja patogeenien nopeaan diagnoosiin. Molekyylitekniikoiden käyttö lisää diagnosointimahdollisuuksia, kun perinteiset viljelymenetelmät eivät ole riittävän herkkiä, luotettavia tai nopeita. Tämän työn tarkoituksena oli kehittää molekyylidiagnostinen testi naudan utaretulehdusta eli mastiittia aiheuttavien patogeenien identifiointiin. Menetelmä sisältää hyvin konservoituneen DNA alueen monistamisen, minkä jälkeen aiheuttajamikrobi identifiodaan amplikonin polymorfian perusteella. Kirjallisuusosassa perehdyttiin mastiittia aiheuttaviin mikrobeihin, mastiitin hoitoon ja diagnostiikkaan sekä sen aiheuttamiin taloudellisiin vaikutuksiin. Lisäksi kirjallisuuskatsauksessa käsiteltiin eri patogeenien molekyylidiagnostiikkamenetelmiä sekä rrn-operonia. Viime vuosien aikana suomalainen bioteknologiayritys Finnzymes on tutkinut useita eri lähestymistapoja mastiittitestin kehittämisessä ja ne on esitetty lyhyesti, jotta selviäisi, miksi tässä työssä käytettyyn menetelmään päädyttiin. Kokeellisen osan tarkoituksena oli kehittää uusi identifiointitesti mastiittipatogeeneille. Menetelmä perustuu rrn-operonin monistamiseen PCR:n avulla, minkä jälkeen bakteerit identifioitiin geenin polymorfiaan perustuvan katkoskirjon avulla. Menetelmä testattiin EELAsta (Eläinlääkintä- ja Elintarvikelaitos) saaduilla kotimaisilla mastiittimaitonäytteillä. Mastiittidiagnostiikkatestin kehittäminen onnistui hyvin. Kaikki tärkeimmät patogeenit pystyttiin identifioimaan maitonäytteistä eristämällä bakteeri-DNA ja monistamalla kohdegeeni, minkä jälkeen monistetut bakteeri-DNA-fragmentit pilkottiin restriktioentsyymeillä. Jatkossa on tarkoitus testata menetelmää ulkomailta saaduilla näytteillä, jotta selviäisi, onko eri mastiittipatogeenilajien kohdegeenissä enemmän polymorfisia eroja maiden ja maanosien välillä kuin Suomessa.
Description
Supervisor
Nordström, Katrina
Thesis advisor
Bredbacka, Peter
Keywords
Other note
Citation