Lipoksygenaasin aktiivisuusmääritys- ja seulontamenetelmät

No Thumbnail Available
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Helsinki University of Technology | Diplomityö
Checking the digitized thesis and permission for publishing
Instructions for the author
Date
2003
Major/Subject
Bioprosessitekniikka
Mcode
Kem-70
Degree programme
Language
fi
Pages
88 s. + liitt 4
Series
Abstract
Tutkimuksen tavoitteena oli kehittää menetelmä lipoksygenaasia tuottavien mikrobien seulontaan elatusmaljalla. Tavoitteena oli myös mikrotiitterilevylle soveltuvan lipoksygenaasin aktiivisuusmääritysmenetelmän kehittäminen sekä lipoksygenaasin tuottaminen ravistelukasvatuksissa. Työn kirjallisuusosassa on käsitelty lipoksygenaasin katalysoimia reaktioita, esiintymistä kasvikunnassa ja mikrobeissa sekä lipoksygenaasin ominaisuuksia. Lisäksi on käsitelty lipoksygenaasin aktiivisuusmääritysmenetelmiä ja bioteknisiä sovelluksia. Tutkimusosassa tarkasteltiin aluksi lipoksygenaasin aktiivisuusmääritysmenetelmiä. Kirjallisuudesta valittujen menetelmien lineaarisuutta ja lipoksygenaasin detektiorajaa eri menetelmissä tutkittiin soijan lipoksygenaasilla. Tulosten perusteella valittiin 3-(dimetyyliamino)bentsoehapon ja 3-metyyli-2-bentsotiatsolinonihydratsonin väliseen reaktioon perustuva menetelmä jatkotutkimuksiin. Menetelmän lineaarisuutta tutkittiin mikrotiitterilevyllä ja sen havaittiin soveltuvan lipoksygenaasin aktiivisuusmääritykseen. Menetelmän soveltuvuutta lipoksygenaasi-indikaattoriksi elatusmaljalla tutkittiin soijan lipoksygenaasilla ja lipoksygenaasia tuottavalla Thermoactinomyces vulgaris -bakteerilla. Menetelmä toimi soijan lipoksygenaasilla, mutta ei T. vulgaris -bakteerilla. Lipoksygenaasin substraatin, linolihapon, havaittiin inhiboivan T. vulgaris -bakteerin kasvua. T. vulgaris -bakteeria ja useita homeita, joista on kirjallisuuden mukaan eristetty lipoksygenaasia, kasvatettiin ravistelupulloissa. T. vulgaris -bakteeri tuotti lipoksygenaasia, mutta useimpien homeiden kohdalla lipoksygenaasin tuotto jäi hyvin vähäiseksi. Kasvatusalustan vaikutusta lipoksygenaasin tuottoon tutkittiin kasvattamalla T. vulgaris -bakteeria erilaisilla kasvatusalustoilla. Soijaöljyn ja soijajauhon komponenttien läsnäolon kasvatusalustassa havaittiin parantavan lipoksygenaasiaktiivisuuden saantoa.
Description
Supervisor
Leisola, Matti
Thesis advisor
Reinikainen, Tapani
Keywords
Other note
Citation