Glycosylation of milk-coagulating aspartic proteinases

No Thumbnail Available

URL

Journal Title

Journal ISSN

Volume Title

Helsinki University of Technology | Diplomityö
Checking the digitized thesis and permission for publishing
Instructions for the author

Authors

Date

2001

Department

Kemian tekniikan osasto

Major/Subject

Bioprosessitekniikka

Mcode

Kem-70

Degree programme

Language

en

Pages

102 s. + liitt. 25

Series

Abstract

Työssä tutkittiin juuston valmistuksessa juoksutteena käytettävien aspartaattiproteinaasien glykosylointia. Aspartaattiproteinaasit puhdistettiin juoksutevalmisteista. Vasikan, lampaan ja vuohen kymosiini -entsyymien, Aspergillus niger var. awamori -homeella tuotetun rekombinantin vasikan kymosiinin sekä Rhizomucor miehei -homeen tuottaman aspartaattiproteinaasin glykosylointiaste määritettiin. Lisäksi tutkittiin kahden viimeksi mainitun entsyymin N -glykaanien rakennetta. Työn kirjallisuusosassa tarkasteltiin aspartaattiproteinaasien käyttöä juuston valmistuksessa. Samoin selvitettiin glykosyloinnin merkitystä juustonvalmistusprosessissa tärkeille entsyymin ominaisuuksille sekä rekombinattien entsyymien eritykselle eukarioottisista isännistä. Lopuksi käytiin läpi analyysimenetelmiä, joita yleisesti käytetään glykoproteiinien tutkimuksessa. Tutkimusosan tulokset osoittivat, että vasikan, lampaan että vuohen kymosiini -entsyymit olivat pääasiassa glykosyloimattomia. Lampaan kymosiinin kohdalta tulos kyseenalaistaa aiemmin julkaistun havainnon, jonka mukaan entsyymi on täysin glykosyloitu. Vasikan kymosiinista alle 1% molekyyleistä havaittiin glykosyloiduksi, mikä vastaa aiemmin julkaistuja tuloksia. A. niger var. awamori -homeella tuotetun rekombinantin vasikan kymosiinin todettiin olevan osittain glykosyloitu. 15-30% molekyyleistä kantoi N-glykaaneja, jotka koostuivat N-asetyyliglukosamiinista, mannoosista ja galaktoosista suhteessa 2:7:6. R. miehei-homeen aspartaattiproteaasin kolmesta potentiaalisesta N-glykosylointipaikasta kahteen oli kiinnittynyt oligosakkaridi. Nämä koostuivat N-asetyyliglukosamiinista ja mannoosista tasasuhteessa ja olivat kooltaan pienempiä kuin aiemmin tutkitun villityypin R. miehei-kannan tuottamat glykaanit. Tulokset viittaavat siihen, että teollinen R. miehei -kanta on mutantti, joka tuottaa poikkeuksellisen lyhyitä N -glykaaneja.

Description

Supervisor

Leisola, Matti

Thesis advisor

Rahbek-Nielsen, Henrik

Keywords

Other note

Citation

Permanent link to this item

https://urn.fi/URN:NBN:fi:aalto-2020120447627

Collections

[dipl] Teknillinen korkeakoulu / TKK