Enzymatic synthesis and characterisation of protein-phenolic acid conjugates
No Thumbnail Available
URL
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Helsinki University of Technology |
Diplomityö
Checking the digitized thesis and permission for publishing
Instructions for the author
Instructions for the author
Authors
Date
2007
Department
Major/Subject
Orgaaninen kemia
Mcode
Kem-4
Degree programme
Language
en
Pages
ix + 95 s. (+9)
Series
Abstract
Fenolisilla ryhmillä on merkittävä vaikutus proteiinien ja hiilihydraattien ominaisuuksiin. Tämän tutkimuksen kirjallisuusosuudessa tarkasteltiin fenolisten ryhmien entsymaatista ja kemiallista hapettumista. Tutkimuksen kokeellisessa osuudessa selvitettiin piparjuuresta eristetyn peroksidaasin, Trametes hirsuta lakkaasin ja Trichoderma reesei tyrosinaasin kykyä katalysoida hetero-ristisidosten muodostumista proteiinin tyrosiinien ja sekä vapaiden että hiilihydraatti-sitoutuneiden fenolisten happojen välille. Malliyhdisteinä käytettiin a-kaseiinia, ferulahappoa, p-kumaarihappoa, rukiin arabinoksylaania sekä Bacillus subtilis ksylanaasilla tuotettuja kauran ksylaanin oligomeerejä. Entsymaattisia reaktiota seurattiin SDS-PAGE analyysillä, molekyylien kokoon perustuvalla nestekromatografialla sekä fluoresenssimittauksilla. Peroksidaasin, lakkaasin ja tyrosinaasin kyvyt katalysoida proteiinien ja fenolisten happojen konjukaattien muodostumista erosivat selvästi toisistaan. Lakkaasi sekä vielä tehokkaammin tyrosinaasi katalysoivat a-kaseiinin ristisitoutumista, kun taas peroksidnasikäsittelyssä ristisitoutumista ei tapahtunut lainkaan. Vapaiden fenolisten happojen lisääminen reaktioseokseen lisäsi proteiinin ristisitoutumista lakkaasi- ja peroksidaasikäsittelyissä, mutta esti hieman proteiinin ristisitoutumista tyrosinaasikäsittelyissä. Suurta tyrosinaasiannosta käytettäessä p-kumaarihappo kuitenkin lisäsi proteiinin ristisitoutumista. Heterorististidosten muodostuminen proteiinin ja kauran ksylaanin oligomeerien välille havaittiin lakkaasi- ja tyrosinaasikäsittelyissä.Description
Supervisor
Koskinen, AriThesis advisor
Selinheimo, EmiliaMattinen, Maija-Liisa