Functional studies of yeast fumarase

No Thumbnail Available

URL

Journal Title

Journal ISSN

Volume Title

Helsinki University of Technology | Diplomityö
Ask about the availability of the thesis by sending email to the Aalto University Learning Centre oppimiskeskus@aalto.fi

Authors

Date

2003

Department

Kemian tekniikan osasto

Major/Subject

Bioprosessitekniikka

Mcode

Kem-70

Degree programme

Language

en

Pages

67+22

Series

Abstract

Tässä diplomityössä Saccharomyces cerevisiae hiivaa käytettiin malliorganismina HLRCC:ksi nimetyn (Hereditary Leiomyomatosis and Renal Cell Cancer) mitokondriaalisen häiriön tutkimisessa, jonka on todettu olevan yhteydessä mutaatioihin fumaraasia koodaavassa geenissä. Tutkimuksen tavoitteena oli tuoda esiin tietoa taudin syntyyn johtavista mekanismeista. Tutkimuksessa tehtiin kannat, joissa ilmentyivät fumaraasin mutanttiversiot H153R tai K187R. Tehtyjen kantojen fenotyyppejä sekä funktionaalisuutta tutkittiin eri hiilenlähteillä tehdyillä kasvukokeilla, proteiiniekspressiotesteillä ja entsyymiaktiivisuusmittauksilla. RNA-mikrosirutekniikkaa käytettiin kantojen transkriptionaaliseen profilointiin. Mutatoitujen kantojen todettiin tuottavan fumaraasia, mutta entsyymiaktiivisuuksissa havaittiin huomattavaa laskua. Tämän arveltiin johtuvan inaktivoivista mutaatioista. Tätä oletusta tukivat myös RNA-mikrosirutekniikan tulokset, joissa mutaation sisältävissä kannoissa fumaraasin sekä useiden Krebsin syklin entsyymien geeniekspressio oli laskenut villityypin sisältävään kantaan nähden. Yleisesti todettiin 355:llä geenillä kohonnut ja 84:llä laskenut ekspressiotaso mutaation tai deleetion vaikutuksesta. Mutatoidut entsyymit näyttivät kuitenkin mahdollistavan solun osittaisen mitokondriofunktion, joka deleetiokannalta puuttui kokonaan. Tulosten mukaan H153R-mutaatio vaikutti haitallisemmalta solulle kuin K187R-mutaatio. Tehtyjen kokeiden perusteella S. cerevisiae on toimiva malli HLRCC:n tutkimiseen.

Description

Supervisor

Leisola, Matti

Keywords

Other note

Citation

Permanent link to this item

https://urn.fi/URN:NBN:fi:aalto-2020120449824

Collections

[dipl] Teknillinen korkeakoulu / TKK