Enzymatic cell disruption of Streptococcus bacteria
No Thumbnail Available
URL
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Helsinki University of Technology |
Diplomityö
Checking the digitized thesis and permission for publishing
Instructions for the author
Instructions for the author
Authors
Date
2008
Department
Major/Subject
Bioprosessitekniikka
Mcode
Kem-70
Degree programme
Language
en
Pages
vi + 80 (+14)
Series
Abstract
Työn tarkoituksena oli kartoittaa bakteriolyyttisiä entsyymejä sekä mahdollisuuksia niiden käyttöön Streptococcus -suvun bakteerien solujen hajotuksessa. Tavoitteena oli löytää entsyymi tai entsyymien yhdistelmä, joka hajottaisi malliorganismina käytetyn Streptococcus pyogenes - bakteerin soluseinää nopeasti huoneenlämmössä ja lähellä neutraalia pH-arvoa. Kirjallisuusosassa on tarkasteltu erilaisia bakteriolyyttisiä entsyymejä sekä niiden soveltuvuutta Streptococcus -suvun bakteerien hajotukseen. Havaittiin, että eri organismeista eristettyjä bakteriolyyttisiä entsyymejä on tutkittu paljon, mutta kaupallisia tuotteita on melko vähän tarjolla. Kirjallisuusosassa on lisäksi kuvattu streptokokki-solujen erityispiirteitä, sillä erityisesti soluseinän rakenteen tunteminen on edellytys entsymaattinen soluhajotuksen kehitystyölle. Tutkimusosassa tutkittiin muutaman kaupallisen entsyymipreparaatin soveltuvuutta S. pyogenes - bakteerin hajotukseen. Entsyymien tehokkuutta bakteerin soluseinän rakenteiden hajotuksessa mitattiin turbidometrisesti bakteerin antigeenin ja spesifisen vasta-aineen välisen immunologisen reaktion avulla. Työssä seulottiin entsyymit ensin vaikutusajan perusteella. Parhaiten toimivat labiaasi, mutanolysiini ja achromopeptidaasi, jotka hajottivat soluseinää tehokkaasti alle 2 minuutissa. Näiden kohdalla tutkittiin myös entsyymikonsentraation vaikutusta soluhajotukseen. Erityisesti labiaasilla ja mutanolysiinillä oli havaittavissa optimikonsentraatio, jonka jälkeen pitoisuuden lisääminen ei parantanut merkittävästi tuloksia. Työn seuraavassa vaiheessa tutkittiin labiaasin, mutanolysiinin ja achromopeptidaasin soluhajotuksen tehostamista yhdistelemällä eri entsyymejä. Entsyymeitä, joiden pH-optimialueet olivat samanlaisia, yhdistettiin keskenään. Poikkeuksena oli labiaasi, joka havaittiin tehokkaaksi sekä happamalla että neutraalilla pH-alueella. Tutkituilla entsyymikombinaatioilla ei havaittu merkittävää synergistista aktiivisuutta. Labiaasin ja mutanolysiinin soluhajotusteho ei parantunut merkittävästi neutraalissa pH-arvossa. Ainoastaan achromopeptidaasin tehostamisessa labiaasilla tai mutanolysiinillä saatiin aikaan pieni tasokorotus tehokkuudessa verrattuna soluhajotukseen näillä entsyymeillä yksinään.Description
Supervisor
Leisola, MattiThesis advisor
Kylmä, Anna-KaisaHäivä, Veli-Mies
Viiala, Mervi
Keywords
bacterial, entsymaattinen, cell disruption, soluhajotus, enzymatic